Вірус гепатиту С – це вірус, який містить молекулу РНК. Він здатний уникати імунної відповіді організму завдяки високим здібностям до мутації. Розрізняють шість основних генотипів вірусу і безліч субтипов. У нашому регіоні в основному поширені 1, 2 і 3 генотипи.

У 75-80% хвороба переходить в хронічну форму, що викликає фіброз печінки – стан, при якому тканини печінки замінюються сполучною тканиною. Фіброз, в свою чергу, призводить до раку або цирозу. Основний шлях передачі захворювання – через кров. Якщо у людини є показання до проведення тесту на гепатит С, йому проводять два основних тесту. Визначають антитіла до вірусу, і при їх відсутності вважається, що гепатиту у нього немає. Якщо ж в крові виявляється наявність антитіл до вірусу гепатиту, проводиться аналіз методом ПЛР.

РНК таким методом визначається в крові вже через 10-12 днів після інфікування і свідчить про те, що вірус активно розмножується в організмі. У цей період виявити вірус іншим способом просто неможливо, так як специфічних антитіл він ще не виробляє і ураження печінки ще непомітні при біохімічних аналізах і біопсії.

Різновиди досліджень методом ПЛР

Аналіз методом полімеразної ланцюгової реакції має певні переваги:

1. При такому дослідженні проводиться визначення самого вірусу, а не продуктів його життєдіяльності. При цьому існує можливість визначити вид збудника.
2. Методика має високу специфічність завдяки тому, що досліджується тільки певну ділянку ДНК, зменшується йязикурність отримання хибних результатів.
3. Має дуже високу чутливість, визначається навіть мінімальну кількість вірусу в крові.

Існує два основні методи дослідження крові на гепатит С за допомогою ПЛР: якісний і кількісний аналіз ПЦР. Якісний метод використовується для визначення факту наявності вірусу. Всім у кого в крові були виявлені антитіла до гепатиту, проводиться такий аналіз. Результат може бути тільки двох типів: «виявлено» і «не виявлено», останнє значення вважається нормою.

Позитивний результат тесту означає, що в зразку були знайдені фрагменти РНК вірусу, що, в свою чергу, говорить про те, що людина була інфікована гепатитом. У разі негативного результату можливі два варіанти: інфікування не було або його концентрація настільки мала, що не виявляється даною методикою.

Кількісний метод відрізняється по суті дослідження, за його завданням і за показаннями. Не всі хворі на гепатит проходять такий аналіз. У нього, як і у будь-якого іншого, існують певні цілі. Визначення вірусного навантаження або кількісний аналіз ПЦР на РНК вірусу використовується:

• для визначення РНК вірусу в крові і постановки діагнозу «вірусний гепатит»;
• для прогнозування хронізації гепатиту і перебігу хвороби;
• для моніторингу противірусного лікування і прийняття рішення про його продовження, скорочення або про зміну тактики лікування.

Дослідження проводиться за наявності таких показань:

• гепатит С виявлений при якісному дослідженні і в крові виявлено антитіла;
• при мікст-гепатитах;
• якщо планується проведення противірусної терапії;
• під час і після лікування від гепатиту С;
• при наявності хронічного і гострого гепатиту С.

Тест проводиться для оцінки кількості одиниць вірусу в заданому обсязі зразка крові 1 см? або 1 мл. Результати наводяться в цифрах. Показники використовуються: МО / мл, що означає міжнародна одиниця на мілілітр і копії на мл, кількість копій РНК в 1 мл зразка. Чим вище кількісний показник аналізу, тим більша йязикурність передачі вірусу іншій людині.

Р-ДНК – метод розгалуженої ДНК. Більш простий і недорогий метод. Використовується для більшої кількості зразків, має невисоку чутливість, від 500 МО / мл. При такій чутливості є вірогідність не визначити вірус, навіть якщо він присутній в крові.

ТМА – метод транскрипционной ампліфікації. Така методика виявляє в крові нуклеїнові кислоти. Має невисоку вартість і при цьому високу чутливість, від 5-10 МО / мл. Відносно нова методика, що дозволяє прискорити і здешевити процес тестування.

Результати кількісного аналізу визначення РНК вірусу, представлені лабораторією, розшифровуються таким чином:

Числове значення кількості вірусу, МО / млРасшіфровка результатів Чи не обнаруженоНорма для здорових людей. Значення вірусу нижче межі чутливості методу або він відсутній зовсім. До 1.8 * 10 ^ 2Концентрація нижче лінійного діапазону. До 8 * 10 ^ 5 Вірус в крові виявлений. Вірусне навантаження низька. Більше 8 * 10 ^ 5 Вірус виявлений. Вірусне навантаження висока. Більше 2,4 * 10 ^ 7Вірус виявлений. Віремія висока, вище лінійного діапазону.

Результати кількісного аналізу можуть подаватися як в одиницях МО / мл, так і в копіях на мл. При цьому коефіцієнт перекладу зазвичай відрізняється для різних лабораторій і методик. Його значення коливаються в межах від одного до п’яти, прийнято вважати, що в середньому 1 МО – це 4 копії на мл.

Метод Коефіцієнт перерахунку, копій на мл в 1 МО Amplicor HCV Monitor v.2.0 (руч.) 0.9 HCV Monitor v2.0 (напівавт.) 2.7 Versant HCV RNA 3.05.2 LCx HCV RNA3.8 SuperQuant3.4

Застосовність дослідження виремии на різних етапах

Аналіз застосовується для виявлення активної інфекції в організмі. За його результату можна судити про те, наскільки йязикурним є передачі вірусу. Це важливо, наприклад, при вагітності, коли мова йде про можливість зараження дитини від матері хворої на гепатит.

Аналіз проводиться тільки після виявлення наявності в крові антитіл до вірусу. Він необхідний, оскільки до 25% людей, які перенесли гостру форму гепатиту, одужують самі по собі, і у них не виявляється вірус при лабораторних дослідженнях. Результати використовуються для оцінки ефективності проведення лікування і до нього.

ПЛР діагностика проводиться до лікування, щоб в подальшому визначити його ефективність. Йязикурність успішного результату лікування обернено пропорційна цим параметром. Чим він вищий – тим гірше прогноз.

Під час лікування аналіз проводиться на 1, 4, 12, 24 тижнях. Лікування дає повний вірологічної відповідь за уязика, що вірусне навантаження таким аналізом не визначається.

Якщо через 12 тижнів після початку терапії показник не знижується на дві логарифмічні одиниці, то найіязикурніше ця терапія не допоможе в цьому конкретному випадку.

В аналізах падіння вірусного навантаження на логарифмічну одиницю виражається в зменшенні кількості нулів результату на один. Наприклад, з 1 000 000 МО вона повинна зменшиться до 100 000 МО.

Після лікування визначається для виявлення рецидивів. Так, відхилення цього параметра від норми говорить про те, що кількість вірусу в організмі зростає і, таким чином, хвороба повертається.

Деякі показники, можуть впливати на результат. Перш за все, це можлива помилка лабораторії, порушення норм проведення дослідження, норм утримання і підготовки зразків, а також:

• забруднення зразка біоматеріалу;
• наявність в крові залишкових слідів гепарину;
• присутність в крові інгібіторів – субстанцій, які представляють собою хімічні сполуки або білки, які впливають на компоненти ПЛР.

Відрізнятися результати дослідження можуть також для різних лабораторій, що обумовлюється застосуванням різних реактивів і інших причин. Таке явище абсолютно нормально. Тому для правильної оцінки ефективності лікування варто проводити аналіз в одній і тій же лабораторії.

Важливі зауваження з приводу методики дослідження:

• За рівнем вірусного навантаження не можна судити про ступінь ураження печінки або тяжкості перебігу самого гепатиту. Для оцінки цих показників, необхідно проводити додаткові дослідження, такі як біохімічний аналіз крові, біопсія, еластометрія і інші.
• При плануванні та противірусної терапії, крім показника виремии, важливо визначити генотип вірусу.